Ścisła obserwacja wiary katolickiej przez jej rodziców odegrała ważną rolę w dzieciństwie Madonny: "Moja matka była fanatykiem religijnym", wyjaśnia Madonna, "W moim domu zawsze byli księża i zakonnice, kiedy byłem dzieckiem". Wiele elementów ikonografii katolickiej, w tym posągi Najświętszego Serca matki, zwyczaje sióstr zakonnych w katolickiej szkole podstawowej i ołtarzu, gdzie modliły się codziennie wraz z rodziną, stało się później przedmiotem najbardziej kontrowersyjnych dzieł Madonny.
Innym ważnym czynnikiem wpływającym na wczesne życie Madonny była jej matka, u której zdiagnozowano raka piersi podczas ciąży z młodszą siostrą Madonny. Leczenie musiało być opóźnione do osiągnięcia przez dziecko dorosłości, ale do tego czasu choroba stała się zbyt ciężka. 1 grudnia 1963 roku, w wieku 30 lat, zmarła matka Madonny. Madonna miała zaledwie pięć lat w chwili śmierci matki, a utrata matki miała ogromny wpływ na jej dorastanie. Nawiedzona wspomnieniami o kruchości i biernym zachowaniu matki w ostatnich dniach jej życia, Madonna była zdeterminowana, aby jej własny głos był słyszalny. "Myślę, że głównym powodem, dla którego mogłem się wypowiedzieć i nie byłem zastraszony, był fakt, że nie miałem matki", mówi. "Na przykład, matki uczą cię dobrych manier. I nic się z tych zasad i przepisów nie nauczyłem".